Cómo identificar un hidrato de carbono a través de reactivo Bradford

Las manchas están disponibles para identificar las cantidades y los tipos de carbohidratos en una solución. Reactivo de Bradford , tradicionalmente , se utiliza sólo para cuantificar la cantidad de proteínas en una solución . Sin embargo , hay dos casos específicos en los que usted podría utilizar el reactivo de Bradford para identificar los carbohidratos : cuando los hidratos de carbono se encuentran en forma de glicoproteínas - en otras palabras , los azúcares unidos a las proteínas - y cuando usted sabe que su solución consiste en su totalidad , ya sea de hidratos de carbono o proteínas, y quiere confirmar que no contiene proteins.Things que necesitará Las placas de ensayo
Espectrofotómetro
kit de tinción Bradford
Los materiales estándar de manejo de líquidos de laboratorio
Mostrar Más instrucciones
Cuantificación glicoproteínas Matemáticas 1

Calentar el espectrofotómetro al dejar actuar durante al menos 15 minutos antes de empezar a usarlo .
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Preparar muestras pequeñas que han conocido concentraciones de glicoproteínas o " estándares conocidos . " Iniciar sus concentraciones tan altas como 100 microgramos de glicoproteína por mililitro (ml) de agua destilada , y para cada estándar posterior , diluir su concentración por medio; es decir, 50 microgramos /ml, 25 microgramos /ml .
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Añadir tinte reactivo de Bradford y azul brillante G desde su kit de ensayo de Bradford a cada estándar conocido. Deje reposar y actuar durante cinco minutos.
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Preparar la muestra para la que desea cuantificar su concentración glicoproteína. La muestra deberá contener entre cinco y 100 microgramos de glicoproteína por ml . Agregar colorante reactivo de Bradford y Azul Brillante G. de
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Coloque la placa de ensayo que contiene las normas y las incógnitas en un espectrofotómetro. Para los estándares , obtener una curva de calibración , concentración conocida absorbancia gráfica vs . Esta curva , para el intervalo de concentraciones usadas como se mencionó anteriormente , debe ser lineal . Calcular una ecuación lineal para describir la curva .
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Enchufe sus valores de absorbancia para la muestra conocida en la ecuación lineal que obtuvo en el paso anterior . Calcular la concentración glicoproteína para su muestra .
Usando Branford Reactivo para confirmar una solución consiste en carbohidratos
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Añada colorante de Bradford y azul brillante G para la muestra desconocida en el placa de ensayo.
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Añada colorante de Bradford y azul brillante G para otro pozo de la placa de ensayo , sin añadir soluciones conocidas o desconocidas .
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Lea la placa de ensayo en el espectrofotómetro , a 465 y 595 nm . El único colorante de Bradford que contiene bien y Azul brillante G deben tener absorbancia pico - la longitud de onda donde la absorbancia está en su máximo; éste será mostrado por el software de espectrofotómetro automáticamente - . de 465

Para la muestra desconocida , si contiene proteínas , el pico de absorción máxima se producirá a 595 nm. Si , por otro lado, la muestra se compone principalmente de los hidratos de carbono , no proteínas , como la única y que contiene colorante de Bradford y azul brillante G, su pico de absorbancia se producirá a 465 nm.