Fuentes de error en la electroforesis en gel

La electroforesis en gel se utiliza en los laboratorios para clasificar y medir las proteínas o ácidos nucleicos. Después de una cuidadosa preparación, las muestras se cargan en un extremo del gel , una corriente eléctrica se aplica , y las muestras de correr hacia el extremo positivo de la bandeja . Como con cualquier procedimiento científico , existe la posibilidad de error humano y otras fuentes de error y debe ser tenido en cuenta a la hora de interpretar los resultados . La contaminación de la muestra
Guantes ayudará a usted ya sus muestras a proteger .

Hagas lo que se está midiendo , el primer paso para obtener resultados exactos es una muestra no contaminada. Tome medidas para evitar la contaminación durante la preparación , usando guantes , utilizando sólo envases estériles , y el cambio de su punta de la pipeta después de cada uso . También tenga cuidado de no contaminar su pipeta tirando de su muestra más allá de la punta .
Gel Problemas
mediciones cuidadosas y la concentración adecuada para su gel son la clave .

Muchos errores derivarse de problemas con el gel. En primer lugar, una concentración de gel incorrecta puede resultar en muestras que se ejecutan demasiado rápido o no en absoluto. Asegúrese de que usted está utilizando una concentración que se mide y se orienta hacia los tamaños generales de la muestra que está intentando medir correctamente . Por ejemplo, cuando nos fijamos en una muestra de ADN , un gel de 0,7 por ciento se permitirá ordenar efectivamente los fragmentos que se encuentran en cualquier lugar de 800 a 10.000 pares de bases de longitud, mientras que los fragmentos más pequeños que precisen un gel de mayor porcentaje .

Gel puede verse comprometida en otras formas . Antes de cargar las muestras , asegúrese de que el gel no tiene cortes o burbujas. Incluso una pequeña imperfección puede afectar a sus resultados. La preparación adecuada del gel es la clave. Siga todas las instrucciones , vierta lentamente para evitar burbujeo , y deja que tus gel se enfríe completamente antes de cargar las muestras. La matriz molecular de la propia gel y la capacidad de la muestra para navegar a través de esta matriz al extremo cargado positivamente de la bandeja son los que demuestran el tamaño de la muestra . Una ruptura física o incluso una temperatura demasiado extremas afectarán esta matriz molecular y poner en peligro la validez de los datos.

Por último , cuando se establece un gel se colocará un peine para crear los pozos donde cargar su muestras . Tenga cuidado de que este peine se coloca correctamente en los recuadros de la bandeja , ya que un peine que crea pozos que son demasiado o demasiado poco puede conducir a errores . El peine no debe llegar completamente a través del gel a la parte inferior de la bandeja , pero debe crear pozos de profundidad suficiente para cargar sus muestras sin desbordar .
Inadecuada Cargando

a pesar de que parece bastante simple , la carga de sus muestras en los pequeños pozos en el gel puede resultar difícil. Lo más importante es asegurarse de que sabe lo mucho que poner en cada pocillo. El exceso de la muestra podría hacer que se corran o se parezca más pequeño de lo que realmente es; muy poca cantidad de la muestra puede ser imposible de ver. Además, no perforar el gel al cargar sus muestras , ya que esto puede causar problemas al igual que otras imperfecciones de gel.
Electrical Problemas Actuales de
Manténgase alejado de la tensión que es demasiado alto .

Un error común para los estudiantes nuevos a la técnica de electroforesis en gel se está ejecutando el gel hacia atrás. Esto sucede cuando las conexiones positivas y negativas se unen a los extremos equivocadas de la bandeja . Puede evitar este error , recordando que la muestra se ejecutará siempre al rojo, así que asegúrese de que el extremo positivo se adjunta en el lado opuesto de la bandeja de los pozos de la muestra.

Los problemas también ocurren con el uso de información incorrecta tensión . Una tensión demasiado alta puede causar la muestra se escurra el otro extremo del gel, mientras que uno que es demasiado bajo puede significar que la muestra se tome demasiado tiempo para correr o no correr lo suficiente para cuantificar útil . La colocación incorrecta de la bandeja dentro de la corriente o de interrupciones en la corriente puede ocasionar que la muestra se ejecuta en diagonal o de manera inconsistente, lo que puede hacer una medición precisa difícil.
Visualización Error

Si usted no puede ver los resultados , es obvio que tendrá problemas para interpretarlas. Una muestra que es demasiado pequeño puede ser difícil de visualizar. Los problemas con los métodos de visualización también pueden comprometer los resultados . Los métodos más comunes usan tintes visibles o bromuro de etidio ( para la visualización bajo luz ultravioleta) . Estos deben ser añadidos al gel en las concentraciones correctas , o visualización tengan estorbo .
Variada Medición Unidos La precisión de las mediciones se verá afectado por sus instrumentos.

medición Variada es una fuente ampliamente aceptada de error en la electroforesis en gel que los estudiantes suelen pasar por alto . Cuando se mide la longitud del gel que muestra su recorrida, la regla se limitará en la precisión , probablemente un milímetro . Cuando su medida parece estar entre milímetros, usted no será capaz de especificar la medida exacta . También , las bandas formadas por electroforesis pueden variar en espesor . ¿Midió a la parte superior o inferior de la banda en cada columna? La consistencia es importante , pero la medición hasta el borde de la banda más alejada del pozo es más común . Tenga en cuenta que esta fuente de error también es probable que afectó a su cantidad de la muestra y las concentraciones de otros componentes de su experimento.