Tipos de Columnas para HPLC

cromatografía líquida de alta resolución (HPLC ) es un tipo de cromatografía en columna diseñada para separar y clasificar los componentes de una muestra sobre la base de sus interacciones con una columna específica . HPLC es distinta , ya que utiliza un entorno más presión para propulsar las muestras líquidas a través de la columna densamente poblado - de manera más eficiente . Hay tres tipos de columnas de HPLC son de uso común hoy en día; que difieren en la naturaleza de la material de embalaje recubrimiento de la columna y la interacción con la muestra . Columna de intercambio iónico

experimentadores utilizan cromatografía de intercambio iónico al separar muestras ionizables , o muestras que pueden convertirse cargada. La fase estacionaria , que es el material sólido que recubre la columna y la interacción con la muestra , posee una carga opuesta a la de la muestra de interés , de manera que la muestra será atraído a las paredes de la columna . Esta atracción se ralentiza el tiempo de elución , o el tiempo que se necesita para pasar todo el camino hacia abajo de la columna en la fase móvil , de la muestra . Los más cargadas las partículas de la muestra son , más atraídos estarán a la fase estacionaria , lo que resulta en un tiempo de elución más lenta . Los tiempos de elución representan la fuerza de la carga de las partículas , y por lo tanto son los principales medios de clasificación de los distintos compuestos dentro de la muestra .
Columna de adsorción

Como su nombre indica , las funciones de adsorción de cromatografía a través de una fase estacionaria adsorbente . La adsorción , que no debe confundirse con la absorción , implica la unión temporal de las partículas de la muestra a la fase estacionaria de la columna . El grado en el que una partícula de muestra puede adsorberse a la fase estacionaria está determinada por la polaridad relativa , o de carga , que la partícula puede poseer en un momento dado . Esto varía de cromatografía de intercambio iónico en el que las partículas no se cargan de forma explícita , sino que son levemente positivas o negativas , a veces a medida que gira de partículas y vibra. A medida que la partícula se mueve hacia abajo la columna , se adsorbe y - adsorbe De en diversos grados basados ​​en el nivel de la polaridad que posee. Tiempos de elución proporcionan una medida del nivel de la polaridad de las partículas de la muestra .
De exclusión por tamaño Columna

Cromatografía de exclusión por tamaño utiliza una técnica de separación diferente a la de intercambio iónico o cromatografía de adsorción . Este tipo de columna es menos común que los otros dos , pero es útil cuando la separación de grandes biomoléculas como proteínas o hidratos de carbono . La fase estacionaria se compone de partículas no cargadas , que son de tamaño controlado y porosa . Cuando la muestra se dispara a través de la columna , las partículas de tamaño más pequeñas son absorbidos temporalmente en el revestimiento de la columna , mientras que las partículas más grandes pasan directamente a través y se eluyen primero . La fase estacionaria está diseñado de manera que la más pequeña sea la partícula, más profundamente en el forro de la columna que penetra , lo que significa que las partículas más pequeñas tendrán la mayor cantidad de tiempo para volver a la superficie y se eluye . Las muestras pueden ser clasificados de acuerdo con el tiempo de elución , que se corresponde directamente con el tamaño de partícula .