Cómo calcular ARN Concentración

Cuantificar la muestra de ARN midiendo su absorbancia de luz ultravioleta (UV ) . Un espectrofotómetro nano -drop usará sólo una o dos microlitros de la muestra , que se puede recuperar . Otros espectrofotómetros requieren una muestra mucho mayor . El coeficiente de extinción para los nucleótidos en una longitud de onda UV de 260 nm en una trayectoria de luz de 1 cm se basa en este 20. coeficiente de extinción , la absorbancia de 40 y micro; g /ml de ARN en las mismas condiciones es uno . Usando esta información , se puede calcular la concentración de su ARN sample.Things que necesitará
Espectrofotómetro
Calculadora de
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Hacer una dilución , si es necesario, de su muestra . Una dilución estándar para una microcubeta es 01:40 . Hacer esta dilución mediante la adición de 2 y micro; L muestra de ARN a 78 y micro; . L de agua estéril
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Siga los protocolos de su espectrofotómetro particular, para calibrar la máquina mediante el uso de un espacio en blanco y luego determinar la densidad óptica de su muestra a una longitud de onda UV de 260nm
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Multiplique la absorbancia de la muestra por su factor de dilución por 40 y mu; . g RNA /ml . La ecuación sería : " la concentración de ARN ( y micro; g /ml ) = ( OD260 ) x x (factor de dilución ) (40 y micro; g de ARN /ml ) /( 1 OD260 unidad ) " ( Hofstra.edu ) Por ejemplo : Si diluida su muestra por 1:40 y su lectura de la absorbancia fue de 0,08 , tendría que multiplicar 0.08 x 40 x 40 = 128 y micro; g /ml = 0,13 y micro; g /y mu; L
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Averiguar la pureza de la muestra mediante la adopción de otra lectura de absorbancia a 280 nm de longitud de onda UV . La relación de OD 260 /OD 280 indicará si - y en qué nivel - la muestra está contaminada con proteínas o fenol . Un resultado de 1,8 a 2,0 indica ARN de calidad.