Cómo extraer Invitrogen Trizol ARN

TRIzol extracción de ácido ribonucleico (ARN ) es un método probado y eficaz para cualquier número de tipos de células y tejidos . Pasos opcionales adicionales pueden ser añadidos para optimizar la extracción de ciertos tejidos vegetales recalcitrantes , pero la mayoría de las células se renunciar a su ARN a este método. ARN extraído por este método suele ser de alta calidad para más reactions.Things enzimáticas que necesitará
Cloroformo
isopropanol
Pipetas
Homogeneizador
Centrífuga
Escala
mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Homogeneizar 50 a 100 miligramos (mg) de tejido en 1 mililitro ( ml ) de reactivo TRIzol con un vaso de teflón o poder homogeneizador para liberar el ARN. El método variará con las células cultivadas en monocapa o en suspensión; en estos casos la lisis celular puede llevarse a cabo a través de pipetear varias veces en lugar
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Aislar el exceso de proteínas , grasas, polisacáridos y tejidos de plantas con la siguiente etapa de centrifugación opcional : . girar los tubos en la centrífuga en un entorno de no más de 12.000 fCR ( fuerza centrífuga relativa ) durante 10 minutos a una temperatura de 2 a 8 grados Celsius ( C). Retire la capa grasa superior y descartar . El sobrenadante resultante se mantenga el ARN; eliminar a un tubo nuevo y desechar el sedimento .
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Incubar la muestra homogeneizada durante cinco a 10 minutos a temperatura ambiente ( 15 a 30 grados Celsius) . A continuación, añadir 0,2 ml de cloroformo por 1 ml de TRIzol . Tapar el tubo y agitar con la mano durante 15 segundos. Incubar nuevamente --- durante dos o tres minutos a temperatura ambiente --- y centrifugar a no más de 12.000 rcf durante 15 minutos a 2 a 8 grados C. La mezcla debe estar ahora en tres fases : una inferior de color rojo , fenol- fase de cloroformo; una interfase; y una fase superior incolora llama la fase acuosa. Retirar la fase acuosa a un tubo nuevo --- esta fase tiene el ARN.
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Añadir 0,5 ml de alcohol isopropílico por 1 ml de TRIzol a la fase acuosa y luego se incuba durante 10 minutos a 15 a 30 grados C. Siga la incubación con centrifugación a no más de 12.000 rcf durante 10 minutos a 2 a 8 grados C. Usted debe ser capaz de ver un ARN de pellets de tipo gel en la parte inferior del tubo .
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descartar el sobrenadante con cuidado pipeteando off . Secar el pellet de ARN durante cinco a 10 minutos, pero no se seque por completo o que no será capaz de lograr una suspensión . Disolver el precipitado en agua libre de RNasa o 100 por ciento de formamida desionizada mezclando con una pipeta y después de incubar durante 10 minutos a 55 a 60 grados C. de
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Almacenar a -70 grados C.