Cómo expresar genes procarióticos en Eukaryotics

Las células procariotas se encuentran predominantemente en las bacterias y arqueas . Se componen de varias moléculas biológicas, incluyendo ADN , proteínas y enzimas rodeadas de una membrana celular sencilla . Estas moléculas realizan todas las funciones biológicas de la célula . Una célula eucariota se encuentra en las plantas y animales más complejos. Contiene orgánulos u órganos celulares , cada uno responsable de una función biológica específica . Todos los orgánulos están rodeados por una membrana celular y la pared celular compleja . Los genes, que comúnmente incluyen segmentos de ADN , a menudo se han transferido entre las células procariotas y eucariotas , como parte de la evolución de la naturaleza . Lo mismo se puede demostrar en el laboratorio utilizando técnicas de transferencia de genes , tales como la transformación y transfection.Things que necesitará
cultura Escherichia coli
Lauria caldo
bucle de inoculación
Incubadora
1 ml de detergente o aclarar el champú baño de agua
Hot News alcohol fría
papaína extrae
293 células T
medio Eagle modificado de Dulbecco o DMEM
cloruro de calcio HEPES buffer solución salina

Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Añade un bucle lleno de cultura E.coli a caldo estéril Lauria en un tubo de ensayo utilizando un asa de siembra estéril. Incubar el tubo de ensayo a 37 grados centígrados durante 24 a 36 horas .
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Mix 5 mililitros de solución de E. coli a 1 mililitro de detergente en un tubo de ensayo y colocar en un baño de agua caliente a 55 a 60 grados Celsius durante 10 minutos . Esto liberará el ADN de las células bacterianas . Añadir extractos enzimáticos papaína al tubo de ensayo y lo coloca en el baño de agua caliente durante 20 minutos más . Esto eliminar las proteínas no deseadas adjuntos al ADN .
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Añadir el alcohol frío a la solución para crear una capa de aproximadamente 1 centímetro en la parte superior de la solución bacteriana . Deje que la solución repose durante dos a tres minutos . El ADN se precipitará a cabo en la solución de alcohol .
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crecer una monocapa de las células 293 T en medio DMEM a 37 grados Celsius . Esto se debe hacer 24 horas antes de que el proceso de transfección .
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Mezclar 10 microgramos de ADN a 61 microlitros de cloruro de calcio y 0,5 mililitro de agua destilada . Añadir la solución a 0,5 mililitro de solución salina tamponada con HEPES , mezclando suavemente mientras que la adición .
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añadir esta mezcla a las 293 líneas de células T y se incuba a 30 grados Celsius durante 16 a 24 horas . El calcio cargado positivamente y el fosfato cargado negativamente se combinan con el ADN y entrar en las células eucariotas . Este método comúnmente conduce a la única expresión a corto plazo de los genes transferidos.