Procedimientos de cultivo de tejidos

cultivo de tejidos es el proceso por el que las células individuales se cultivan en un entorno de laboratorio , aparte del organismo se originaron a partir . El cultivo de tejidos se utiliza para propagar líneas celulares y mantener el crecimiento de células de modo que las condiciones experimentales pueden ser probados . Los estudiantes y los técnicos de laboratorio se asignan con mayor frecuencia esta tarea , ya que es bastante fácil de hacer . Si un laboratorio es lo suficientemente grande , habrá una persona a cargo de cultivo de células para la contaminación puede evitarse . Tipos de células y líneas

células utilizadas para el cultivo se describen por su origen y modo de crecimiento. Las células primarias vienen directamente de un organismo vivo y que pueden proceder de cualquier órgano . Estas células son difíciles de cultivar debido a que tienen una capacidad limitada para dividir , por lo que su vida se extiende corto . Líneas celulares finitas también vienen directamente de tejidos animales y son difíciles de propagar . Estas células pueden ser cultivadas durante varias generaciones y para que duren más tiempo que las líneas primarias directas. Líneas celulares continuas provienen de una acción llamada transformación mediante el cual su genética han cambiado de forma espontánea en la cultura. Estas células son fáciles de propagar , ya que tienen una esperanza de vida casi indefinida , sin embargo , no lo son en calidad de representante del organismo original debido a este cambio .
Obtención celular Stock

las células primarias deben venir directamente del organismo vivo . Por ejemplo, si usted está estudiando las glándulas mamarias de ratón, el ratón debe ser sacrificado , aislado del tejido mamario , y las células se separó y se cultivó en placas de cultivo . Esto es costoso y consume mucho tiempo , pero le dará una indicación más precisa de la aplicación a la vida real. La mayoría de las células sembradas tras el aislamiento morirán dentro de las 48 horas de cultivo por lo que muchos ratones son necesarios para conseguir un gran número de platos saludables. Si usted no tiene el animal necesita para obtener células , usted tendrá que investigar otro laboratorio que está trabajando en el mismo tipo de proyecto y ver si se puede prescindir de algunas células para usted. Las líneas celulares se pueden pedir a las compañías de suministros biológicos u obtenido de otro laboratorio que trabaja con .
Cultivar células

El método de cultivo celular será diferente para cada tipo de célula; Sin embargo , hay algunas reglas generales que aprender para tener éxito. La mayoría de las células se mantuvieron congeladas por lo que la primera tarea consiste en descongelar las células a cabo . Si usted tiene células primarias es imperativo que usted aprenda a cultivarlas de otra persona que tiene mucha experiencia en esa línea celular particular. Las líneas celulares que normalmente vienen con un protocolo a seguir. Células congelados deben descongelarse en un 37 grados C baño de agua caliente rápidamente con el fin de prevenir la muerte celular innecesaria . Además , los medios de crecimiento que se utiliza en las placas también debe calentarse antes de su uso . Después de la descongelación , transferir las células a una placa de cultivo con la cantidad prescrita de medios nutrientes y se incuba durante 24 horas . Este período de tiempo permite que las células se adhieren a la parte inferior del plato de manera que los medios de comunicación se puede retirar el día siguiente y se reemplaza con medio fresco .
Observación y mantenimiento

Controle sus células a diario por los observan con el microscopio. Busque señales de fracaso , como muchos flotadores. Los flotadores son células muertas que ya no se adhiere a la parte inferior de la placa. Use la punta de aspiración de la campana de cultivo de tejidos para evacuar a los medios de comunicación y las células muertas y actualice con los nuevos medios . Las células sanas deberían replicarse y extenderse a medida que maduran en la incubadora. Cuando la parte inferior de la placa está casi completamente cubierta con células , es el momento de separarlos . Cada laboratorio tendrá un protocolo específico de seguir, pero generalmente esto se hace por lavado de las células con una solución tampón y después separar las células de la parte inferior de la placa utilizando los medios de comunicación y una pipeta o raspado . Si utiliza los medios de comunicación , a continuación, llenar la pipeta con los medios de comunicación y luego presione firmemente hacia abajo en la parte inferior de la placa y liberar el líquido. La inundación de líquido de la pipeta se desprender las células y suspenderlas en los medios de comunicación. Si raspa , utilice el rascador de células se indica en el protocolo para suspender las células . Transfiera este medio en suspensión de células a las nuevas placas que se han preparado previamente y se incuba durante 24 horas. Si usted se encuentra con demasiados platos llenos de células , deben ser utilizados o congelados.
Contaminación

La contaminación es un problema grave en el cultivo de tejidos . Muchas semanas de trabajo duro puede ser arruinado con la introducción de bacterias en la incubadora. Los signos de contaminación en el cultivo de tejidos incluyen medios nublado , la observación de las células de formación de grumos en el microscopio , la muerte sin explicación , o un olor inusual . Realice siempre el cultivo de tejidos en una campana de flujo laminar de aire diseñados especialmente para la tarea. No utilice una botella de medio de más de una línea celular. ¿No tienes dos tipos de células diferentes bajo el capó al mismo tiempo. Idealmente , no debería incluso tener más de un tipo de células en cada incubadora, pero a veces esto puede ser poco práctico . Si tiene que compartir , mantiene platos tan lejanos entre sí como sea posible y siempre asegúrese de que su incubadora es limpio.