BCIP NBT Protocolos

nitroazul de tetrazolio , o NBT , es una sustancia química utilizada en bioquímica e inmunología en la detección de una enzima llamada fosfatasa alcalina. Los científicos también usan el compuesto a las condiciones de diagnóstico del sistema de inmunodefensa , tales como la enfermedad granulomatosa crónica . BCIP significa fosfato de 5 - bromo - 4 - cloro - 3 - indolilo . Este compuesto químico se utiliza a menudo en conjunción con NBT para detectar la fosfatasa alcalina a través de una serie de protocolos . BCIP /NBT fosfatasa alcalina solución de sustrato

Durante este protocolo , los científicos a preparar una solución con BCIP , NBT , el levamisol y el tampón de enzima fosfatasa alcalina con un pH de 9,5 . Tampón AP contiene tris (hidroximetil ) aminometano , cloruro de magnesio , el detergente Tween polisorbato 20 y cloruro de sodio . La solución se incuba a temperatura ambiente durante 24 horas y está entonces disponible para su uso.
Detección de ARNm con fosfatasa alcalina

Detección de ARNm con fosfatasa alcalina es un protocolo utilizado para estudiar el ARNm de ácidos nucleicos y ADN en embriones animales . Durante este procedimiento , BCIP /NBT se utiliza como un sustrato para la enzima fosfatasa alcalina . BCIP /NBT se añade a los embriones después de que se enjuagan dos veces en tampón de tinción de fosfatasa alcalina . Sitios ácidos nucleicos aparecen en morado.
Electroforesis y Transferencia Western

Durante este protocolo , los técnicos de separar e identificar los componentes de las proteínas utilizando un aparato de electroforesis en gel y una técnica de Western blot , que requiere el uso de una pieza de equipo que contiene una membrana de nitrocelulosa y los anticuerpos específicos . Después de la electroforesis estándar , los técnicos realizan el protocolo de transferencia de Western , la incubación de las membranas durante 30 minutos en una solución tampón y a temperatura ambiente . Se añade el anticuerpo p47 - phox y se incubó durante una hora . Se añade anticuerpo conjugado con fosfatasa alcalina , y después de una hora , también BCIP /NBT . La reacción se detiene después de 15 minutos de incubación de un enjuague de la membrana con agua.
Aislamiento y diferenciación de las células Medaka

Medaka es un pequeño pez que produce huevos diarios y es ampliamente utilizado en la investigación con células madre embrionarias. Según Kursad Türkşen en "Protocolos de células madre embrionarias : Aislamiento y caracterización , " huevos Medaka se incuban en medio embrión en 78.8 grados Fahrenheit durante siete días. Los embriones se lavaron a continuación en solución salina tamponada con fosfato , se fijaron en una mezcla de metanol - acetona y se tiñeron con BCIP /NBT . Las muestras se mantuvieron en la oscuridad durante 24 horas a 82,4 grados Fahrenheit. Los cromosomas , las células se observan bajo un microscopio.