Cómo desarrollar un anticuerpo

Los anticuerpos son moléculas producidas por los glóbulos blancos , llamados células B , frente a diferentes antígenos. Los antígenos son moléculas que son ajenas a su propio cuerpo. Sus células B pueden responder a un antígeno y producir un anticuerpo específico contra ella . Los anticuerpos son moléculas importantes de su sistema inmunológico y ayudan a eliminar los patógenos que causan enfermedades y toxinas de su cuerpo . Los anticuerpos también se pueden realizar en un laboratorio y se utilizan en muchas aplicaciones médicas y científicas . Más comúnmente , estos anticuerpos se producen en un ratón o una rata contra un antígeno específico . Usted puede desarrollar un anticuerpo contra un antígeno con pocos steps.Things desafiantes que necesitará
Antígeno
Ratones
Las células de mieloma
Cultura medianas y otros productos químicos
placas de cultivo de tejidos y otros equipos de laboratorio
Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Preparar correcta cantidad del antígeno quieres hacer el anticuerpo contra . Su antígeno puede ser una célula entera , una proteína o una molécula de carbohidrato . De acuerdo con un artículo publicado en " Patología Molecular " , de 50 a 100 mcg de proteína o diez millones de células , debería ser suficiente para inmunizar a un ratón. También puede ser que necesite utilizar un adyuvante, especialmente si su antígeno es poco inmunogénica
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Inyectar subcutáneamente proteínas - . Sc - y las células por vía intraperitoneal - IP - en el ratón . Dé una inyección de refuerzo después de unos días o semanas y seguir los títulos de anticuerpos usando cola sangra. Una vez que usted puede detectar títulos de anticuerpos , eliminar las células B del bazo de ratón utilizando métodos asépticos y humanas.
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fusionar el bazo células B de ratón con células de mieloma HGPRT negativos, histocompatibles , mediante la mezcla de las células con un agente de fusión , tal como polietilenglicol . Las células B de mieloma - esplénica resultantes se denominan hibridomas o células híbridas .
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placa las células híbridas en pocillos de cultivo de tejido y empezar a seleccionar contra células de mieloma no fusionadas . Utilice un medio selectivo que contiene hipoxantina , aminopterina y timidina , también conocido como el HAT. Todas las células de mieloma no fusionadas morirán durante esta selección y sólo el hibridoma o células secretoras de anticuerpos sobrevivirán .
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Examine las células en crecimiento con un microscopio y anotar mal crecimiento, emergentes y establecidos hibridomas. Uno que ha establecido líneas de células de hibridoma , transferirlos a mayor placa de cultivo de tejidos. Dentro de 30 días , cambie el medio HAT a HT medio para poner fin al proceso de selección.
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tamizan los hibridomas establecidos para la producción de anticuerpos mediante un ensayo ELISA y continuar con una línea celular que muestra la mayor producción de anticuerpos. También cyropreserve tus mejores productores de líneas celulares de hibridoma y almacenar en nitrógeno líquido
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Purifica tu anticuerpo del medio de crecimiento mediante el uso de una cromatografía de afinidad como proteína A cromatografía líquida de alta resolución - . . HPLC