Cómo construir vectores de expresión

Un genoma humano consta de 3 x 10 ^ 9 pares de bases en 24 cromosomas , sin embargo, no todos los de esta información genética se utiliza . Las regiones activas del genoma se denominan " genes ", que contienen la información utilizada para producir proteínas. Un gen es transcrito por el ácido ribonucleico mensajero (ARNm ), que en última instancia se traduce por los ribosomas en proteína.

vectores de expresión que se utilizan en la biotecnología para producir muchas copias de una proteína específica. Por ejemplo , la insulina utilizada para tratar la diabetes es producida en masa a través de la ayuda de vectores de expresión . Instrucciones
La construcción de un vector de expresión
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Determinar la secuencia de ADN de la proteína específica . Una vez que se determina la secuencia de ADN de la proteína , cortar la secuencia de ADN del genoma utilizando una enzima de restricción específica . Las enzimas de restricción reconocen y se cortan en una secuencia específica del genoma .
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insertar el ADN específico en el vector . Un vector es una molécula de ADN que introduce ADN extraño en una célula huésped , el uso de enzimas de la célula para producir la proteína de la ADN extraño .
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Inserte una secuencia promotora aguas abajo del gen de interés . Un promotor es una región que es reconocida por la ARN polimerasa , que se une a la secuencia y se inicia la transcripción del gen . Añadir la enzima ligasa para unir la secuencia de promotor para el gen de interés .
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Inserte el vector de expresión en una célula huésped a través de transformación , la inducción de agujeros transitorios ( utilizando sal ) en la membrana celular . El vector de expresión puede ser transcrito por ARNm y se traduce en una proteína.
Cribado de un vector de expresión
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Realice una prueba de detección para determinar si la célula huésped tiene la vector de expresión . La célula huésped está chapada primero usando la técnica aséptica ( que pasa el equipo a través de una llama ) sobre una placa de agar para el crecimiento del cultivo celular .
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de transferencia de algunas células de la placa de agar en un disco de papel de nitrocelulosa . Analice las células en el disco mediante el tratamiento con sal . Esto liberará los contenidos de las celdas en el disco .
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Sumergir el disco de papel de nitrocelulosa con una solución de una sonda de anticuerpo específico con una etiqueta fluorescente . El anticuerpo se unirá a la proteína producida por el ADN de interés .
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Exponga el disco de papel de nitrocelulosa a la luz UV . Si la celda tiene el vector de expresión , la célula será fluorescente bajo luz UV debido a la unión del producto de la proteína con el anticuerpo con una etiqueta fluorescente
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extrae el producto de proteína a través de métodos de purificación .; que puede ser utilizada con fines medicinales.